Prodotti

Biex tikkwantifika speċifikament diversi metaboliti ta '5-fluorouracil (5-FU) u żewġ nukleotidi monofosfati endoġeni, żviluppajna metodu oriġinali bbażat fuq kromatografija likwida-spettrometrija tal-massa tandem (LC-MS/MS).Dan l-assaġġ ippermetta d-determinazzjoni ta’: (i) il-produzzjoni intraċellulari ta’ 5-fluoro-2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (5-FdUMP) minn 5-FU jew 5-fluoro-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) , (ii) l-impatt tal-konċentrazzjoni ta' 5-FdUMP fuq il-proporzjon intraċellulari ta' 2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (dUMP)/thymidine-5′-monophosphate (TMP), u (iii) il-firxa tas-sekrezzjoni ta' 5-FdUMP u 5-FU minn ċelloli kkultivati ​​umani minn trasportaturi ABC.Taħt il-kundizzjonijiet sperimentali tagħna, iċ-ċelloli ġew inkubati b'5-FU jew 5-FUrd.Imbagħad, proteini ċellulari ġew preċipitati mill-metanol.Din il-proċedura pprovdiet irkupru ta 'estrazzjoni għolja.Barra minn hekk, biex titkejjel is-sekrezzjoni ta '5-FU u 5-FdUMP miċ-ċelloli, wettaqna kwantifikazzjoni ta' dawn il-molekuli f'medju ta 'kultura.Il-midja ġew jew injettati direttament (5-FU) jew taħt estrazzjoni ta 'fażi solida bl-użu ta' skartoċċ ta 'estrazzjoni ta' Oasis Wax (5-FdUMP).Is-separazzjoni ta 'l-analiti twettqet fuq kolonna dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) b'modalità isokratika bl-użu ta' buffer ta 'format ta' ammonju / metanol / ilma (5/5/90, v / v) bħala fażi mobbli.Il-ħin tal-ġirja ma jaqbiżx is-6.2 min.L-analiti ġew jonizzati f'interface ta 'elettrospray taħt mod ta' jone negattiv.Aħna vvalidajna l-metodu fuq medda ta '2.5-150 ng mL -1 skond il-komposti.Il-varjabbiltà intra-u inter-assay kienet inqas minn 10% fuq sebat ijiem.Il-komposti kollha kienu stabbli fiċ-ċelloli jew fil-medju tal-kultura meta l-kampjuni ġew maħżuna f'-20 °C għal mill-inqas ġimagħtejn, u wara tliet ċikli ta 'iffriżar u tidwib.L-ebda effett matriċi ma ġie osservat fiż-żewġ mezzi.