Prodotti

L-analiżi ta 'avvenimenti ta' fosforilazzjoni madwar il-proteome għadha sfida analitika ewlenija minħabba l-kumplessità enormi tan-netwerks ta 'fosforilazzjoni tal-proteini.F'dan ix-xogħol, aħna nevalwaw il-komplimentarjetà ta 'Lys-N, Lys-C, u trypsin fir-rigward tal-kapaċità tagħhom li jikkontribwixxu għall-analiżi globali tal-fosfoproteoma.Verżjoni raffinata ta 'skambju ta' katjoni qawwi b'pH baxx intużat biex tissepara b'mod effiċjenti peptidi N-terminally aċetilati, fosforilati u mhux modifikati.Total ta '5036 fosfopeptidi mhux redundant jistgħu jiġu identifikati b'rata ta' skoperta falza ta '<1% minn 1 mg ta' proteina bl-użu ta 'kombinazzjoni tat-tliet enzimi.Id-dejta tagħna wriet li l-koinċidenza bejn is-settijiet tad-dejta tal-fosfopeptidi ġġenerati bi proteases differenti kienet marġinali, filwaqt li l-koinċidenza bejn żewġ settijiet ta 'dejta tryptic iġġenerati bl-istess mod instabet li kienet mill-inqas 4 darbiet ogħla.B'dan il-mod, l-użu parallel ta 'Lys-N u trypsin ippermetta żieda ta' 72% fin-numru ta 'fosfopeptidi misjuba meta mqabbla d ma' trypsin waħdu, filwaqt li esperiment ta 'replika ta' trypsin wassal biss għal żieda ta '25%.Għalhekk, meta niffukaw biss fuq id-dejta tat-trypsin u Lys-N, identifikajna 4671 fosfopeptidi mhux redundant.Analiżi ulterjuri tas-siti misjuba wriet li s-settijiet tad-dejta Lys-N u trypsin ġew arrikkit f'motifi ta 'fosforilazzjoni differenti b'mod sinifikanti, u turi aktar li l-approċċi multiprotease huma siewja ħafna fl-analiżi tal-fosfoproteoma.