Prodotti

Il-proteina ORF45 tal-herpesvirus assoċjat mas-sarkoma ta' Kaposi (KSHV) hija proteina tat-tegument immedjata-bikrija speċifika għal gammaherpesvirus.L-istudji preċedenti tagħna wrew ir-rwoli kruċjali tiegħu kemm fl-istadji bikrija kif ukoll fl-aħħar ta 'infezzjoni KSHV.F'dan l-istudju, aħna stħarreġna l-interatomi ta 'ORF45 bl-użu ta' panel ta 'antikorpi monoklonali.Minbarra l-proteini tal-kinase regolata extraċellulari (ERK) u p90 ribosomali S6 kinase (RSK) identifikati qabel, sibna diversi proteini kopurifikati oħra, inklużi dawk prominenti ta '~38 kDa u ~130 kDa.L-ispettrometrija tal-massa wriet li l-proteina 38-kDa hija virali ORF33 u l-proteina 130-kDa hija USP7 ċellulari (protease 7 speċifika għall-ubiquitin).Aħna mmappajna d-dominju li jorbot lil ORF33 mad-19-il aċidi amminiċi karbossili terminali kkonservat ħafna (aa) ta 'ORF45 u d-dominju li torbot lil USP7 mal-motiv tal-kunsens irrappurtat fir-reġjun ċentrali ta' ORF45.Bl-użu ta 'tbajja' ta' immunofluworexxenza, osservajna colocalization ta 'ORF45 ma' ORF33 jew USP7 kemm taħt kundizzjonijiet trasfettati kif ukoll f'ċelloli infettati bil-KSHV.Barra minn hekk, innutajna rilokalizzazzjoni dipendenti fuq ORF45 ta 'porzjon ta' ORF33/USP7 min-nukleu għaċ-ċitoplasma.Sibna li ORF45 ikkawża żieda fl-akkumulazzjoni tal-proteini ORF33 li ġiet abolita jekk jew id-dominju li jorbot lil ORF33 jew USP7 f'ORF45 jitħassar.Barra minn hekk, it-tħassir tat-tarf karbossiliku kkonservat ta 'ORF45 fil-ġenoma KSHV naqqas drastikament il-livell ta' proteina ORF33 f'ċelluli infettati b'KSHV u abolit il-produzzjoni ta 'virions proġeni.Kollettivament, ir-riżultati tagħna mhux biss jiżvelaw komponenti ġodda tal-interatomi ORF45, iżda juru wkoll li l-interazzjonijiet fost dawn il-proteini huma kruċjali għar-replikazzjoni litika KSHV. L-herpesvirus assoċjat ma 'sarkoma ta' Kaposi (KSHV) huwa l-aġent kawżattiv ta 'diversi kanċers umani.KSHV ORF45 hija proteina multifunzjonali li hija meħtieġa għar-replikazzjoni litika KSHV, iżda l-mekkaniżmi eżatti li bihom ORF45 iwettaq il-funzjonijiet kritiċi tiegħu mhumiex ċari.L-istudji preċedenti tagħna wrew li l-proteina ORF45 kollha fiċ-ċelloli teżisti f'kumplessi ta 'piż molekulari għoli.Għalhekk fittxejna li nikkaratterizzaw l-interatomi ta 'ORF45 biex nipprovdu għarfien dwar ir-rwoli tiegħu waqt ir-replikazzjoni litika.Bl-użu ta 'pannell ta' antikorpi monoklonali, stħarrejna l-interatomi ORF45 f'ċelloli infettati bil-KSHV.Aħna identifikajna żewġ sħab ġodda li jorbtu ta 'ORF45: il-proteina virali ORF33 u protease 7 speċifika għall-ubiquitin ċellulari (USP7).Aħna wkoll nuru li l-interazzjoni bejn ORF45 u ORF33 hija kruċjali għall-produzzjoni effiċjenti ta 'partiċelli virali KSHV, li jissuġġerixxi li l-interferenza mmirata ma' din l-interazzjoni tista 'tirrappreżenta strateġija ġdida biex tinibixxi r-replikazzjoni litika KSHV.