Prodotti

Assaġġ ġdid ta 'kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja għal glycosyltransferases ibbażat fuq derivatizzazzjoni b'detezzjoni ta 'aċidu anthranilic u fluworexxenza.

L-analiżijiet ġew żviluppati bl-użu tal-kimika unika tat-tikkettjar tal-aċidu 2-aminobenzoic (2AA; aċidu anthranilic, AA) għall-kejl tal-attivitajiet kemm tal-β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) kif ukoll tal-α2-6 sialyltransferase (ST-6) b'likwidu ta' prestazzjoni għolja kromatografija (HPLC) b'detezzjoni ta 'fluworexxenza (Anumula KR. 2006. Avvanzi fil-metodi ta' derivatizzazzjoni tal-fluworexxenza għal analiżi kromatografika likwida ta 'prestazzjoni għolja ta' karboidrati ta 'glycoprotein. Anal Biochem. 350: 1-23).N-Acetylglucosamine (GlcNAc) u N-acetyllactosamine intużaw bħala aċċettaturi u uridine diphosphate (UDP) -galactose u cytidine monophosphate (CMP) -N-acetylneuraminic acid (NANA) bħala donaturi għal GalT-1 u ST-6, rispettivament.Prodotti enżimatiċi ġew ittikkettati in situ b'AA u ġew separati mis-sottostrati fuq kolonna TSKgel Amide 80 bl-użu ta 'kundizzjonijiet ta' fażi normali.L-unitajiet tal-enżimi ġew determinati mill-ogħla żoni bi tqabbil mal-istandards derivatizzati fl-istess ħin Gal-β1-4GlcNAc u NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Ġew stabbiliti l-linearità (il-ħin u l-konċentrazzjoni tal-enżimi), il-preċiżjoni (intra- u interassay) u r-riproduċibbiltà għall-assaġġi.L-analiżi nstabu li huma utli fil-monitoraġġ tal-attivitajiet tal-enzimi waqt l-iżolament u l-purifikazzjoni.L-analiżi kienu sensittivi ħafna u mwettqa daqs jew aħjar mill-kejl tradizzjonali bbażati fuq iz-zokkor radjuattiv.Il-format tal-assaġġ jista' jintuża wkoll għall-kejl tal-attività ta' transferases oħra, sakemm l-aċċettaturi tal-karboidrati jkun fihom tarf li jnaqqas għat-tikkettar.Ġie żviluppat analiżi għall-aċċettaturi tal-glikoproteini bl-użu ta' IgG.Ġie żviluppat metodu ta 'profil HPLC qasir għas-separazzjoni ta' glycans IgG (biantennary G0, G1, G2, mono- u disialylated), li ffaċilita d-determinazzjoni ta 'attivitajiet GalT-1 u ST-6 b'mod rapidu.Barra minn hekk, dan il-metodu ta 'profiling għandu jkun utli għall-monitoraġġ tal-bidliet fil-glikani IgG f'ambjenti kliniċi.