Prodotti

It-topoloġija tal-membrana tad-dominju tal-kanal colicin E1 ġiet studjata permezz tat-trasferiment tal-enerġija tar-reżonanza tal-fluworexxenza (FRET).Il-FRET kien jinvolvi aċidu amminiku fluworexxenti ġenetikament kodifikat (kumarin) bħala d-donatur u residwu ta 'cysteine ​​ttikkettjat b'mod selettiv marbut b'DABMI (4-(dimethylamino)phenylazophenyl-4'-maleimide) bħala l-aċċettatur FRET.Ir-residwu fluworexxenti coumarin ġie inkorporat fil-proteina permezz ta 'par tRNA ortogonali/aminoacyl-tRNA synthetase li ppermetta inkorporazzjoni selettiva fi kwalunkwe sit fi ħdan id-dominju tal-kanal colicin.Kull varjant kellu mutazzjoni ta' waqfien (TAG) għall-inkorporazzjoni ta' coumarin u mutazzjoni ta' cysteine ​​(TGT) għat-twaħħil tad-DABMI.Sitt distanzi interhelical fi ħdan helizes 1-6 ġew determinati bl-użu ta 'analiżi FRET kemm għall-istati solubbli u marbuta mal-membrana.Id-dejta FRET wriet bidliet kbar fid-distanzi interhelical fost il-helizes 3-6 mal-assoċjazzjoni tal-membrana li pprovdiet għarfien ġdid tal-istruttura marbuta mal-membrana tad-dominju tal-kanal.B'mod ġenerali, l-effiċjenzi interhelical coumarin-DABMI FRET naqsu mal-irbit tal-membrana, u jibnu fuq il-mudell umbrella għall-kanal colicin.Ġie żviluppat mudell tentattiv għall-istat magħluq tad-dominju tal-kanal ibbażat fuq dejta FRET kurrenti u ppubblikata qabel.Il-mudell jissuġġerixxi arranġament ċirkolari ta 'helizes 1-7 f'direzzjoni lejn l-arloġġ mill-ġenb extraċellulari u l-assoċjazzjoni interfaċjali tal-membrana ta' helices 1, 6, 7, u 10 madwar il-helices transmembrane ċentrali ffurmati minn helices 8 u 9.