Prodotti

Ħsara ossidattiva lill-bażijiet tad-DNA komunement tirriżulta fil-formazzjoni ta 'purini ossidizzati, partikolarment 7,8-dihydro-8-oxoguanine (8-oxoG) u 7,8-dihydro-8-oxoadenine (8-oxoA), l-ewwel ikun tajjeb- leżjoni mutaġenika magħrufa.Peress li 8-oxoG huwa faċilment soġġett għal aktar ossidazzjoni meta mqabbel ma 'bażijiet normali, l-inserzjoni ta' bażi matul is-sinteżi tad-DNA biswit forma ossidizzata ta '8-oxoG ġiet investigata in vitro.Mudell sintetiku li kien fih leżjoni waħda ta’ 8-oxoG l-ewwel ġie ttrattat b’ossidanti ta’ elettron wieħed jew taħt kundizzjonijiet ta’ ossiġnu singlet u mbagħad suġġett għal estensjoni tal-primer kkatalizzata minn Klenow fragment exo- (Kf exo-), għoġol thymus DNA polymerase alpha (pol alpha) ) jew DNA polymerase beta umana (pol beta).B'mod konsistenti mar-rapporti preċedenti, dAMP u dCMP huma mdaħħla b'mod selettiv oppost 8-oxoG mat-tliet DNA polymerases.Interessanti, l-ossidazzjoni ta '8-oxoG instab li jinduċi inserzjoni ta' dAMP u dGMP biswit il-leżjoni minn Kf exo- b'inibizzjoni temporanja ta 'estensjoni tal-primer o currir fis-sit tal-bażi modifikata.Barra minn hekk, il-leżjoni tikkostitwixxi blokk matul is-sintesi tad-DNA minn pol alpha u pol beta.Esperimenti b'oligonucleotide template modifikat 8-oxoA juru li kemm 8-oxoA kif ukoll forma ossidizzata ta 'inserzjoni diretta ta' 8-oxoA ta 'dTMP minn Kf exo-.Analiżi spettrometrika tal-massa ta 'oligonukleotidi li fihom 8-oxoG qabel u wara l-ossidazzjoni b'IrCl62-huma konsistenti ma' l-ossidazzjoni primarjament tas-sit 8-oxoG, li tirriżulta fil-formazzjoni ta 'moety guanidinohydantoin bħala l-prodott ewlieni.Ma nkisbet l-ebda evidenza għall-formazzjoni ta' siti bażiċi.Dawn ir-riżultati juru li forma ossidizzata ta '8-oxoG, possibbilment guanidinohydantoin, tista' tidderieġi qari ħażin u inserzjoni ħażina ta 'dNTPs matul is-sintesi tad-DNA.Jekk tali proċess seħħ in vivo, ikun jirrappreżenta leżjoni mutaġenika puntwali li twassal għal trasverżjonijiet G-->T u G-->C.Madankollu, il-forma ossidizzata korrispondenti ta '8-oxoA primarjament turi inserzjoni korretta ta' T matul is-sintesi tad-DNA b'Kf exo-.