Prodotti

Il-mod li bih l-effetti ta' mutazzjonijiet simultanji jingħaqdu biex jibdlu l-attività enżimatika mhuwiex faċilment prevedibbli minħabba li dawn l-effetti mhux dejjem huma addittivi b'mod lineari.Għalhekk, il-karatterizzazzjoni tal-effetti ta 'mutazzjonijiet simultanji ta' residwi ta 'amino aċidi li jorbtu s-sottostrat tista' tagħmel kontribut sinifikanti għall-fehim tal-ispeċifiċità tas-sottostrat tal-enzimi.Fil-beta-glycosidase minn Spodoptera frugiperda (Sfbetagly), iż-żewġ residwi Q39 u E451 jinteraġixxu mas-sottostrat u dan huwa essenzjali għad-definizzjoni tal-ispeċifiċità tas-sottostrat.Mutanti doppji ta 'Sfbetagly (A451E39, S451E39 u S451N39) ġew ippreparati permezz ta' mutaġenesi diretta lejn is-sit, espressi f'batterji u ppurifikati bl-użu ta 'kromatografija ta' affinità.Dawn l-enzimi ġew ikkaratterizzati bl-użu ta 'p-nitrophenyl beta-galactoside u p-nitrofenyl beta-fucoside bħala sottostrati.Il-proporzjon k cat/Km għal mutanti singoli u doppji ta' Sfbetagly li fihom mutazzjonijiet diretti lejn is-sit fil-pożizzjonijiet Q39 u E451 intuża biex juri li l-effett fuq l-enerġija ħielsa ta' ESdouble dagger (kumpless tal-istat ta' tranżizzjoni tal-enzimi) tal-mutazzjonijiet doppji (Gdouble daggerxy) mhix is-somma tal-effetti li jirriżultaw mill-mutazzjonijiet uniċi (Gdouble daggerx u Gdouble daggery).Din id-differenza f'Gdouble dagger tindika li l-effetti tal-mutazzjoni waħdanija parzjalment jikkoinċidu.Għalhekk, dan l-effett komuni jgħodd darba biss f'Gdouble daggerxy.Dejta kristallografika dwar beta-glycosidases tiżvela l-preżenza ta 'bond ta' idroġenu bidentat li jinvolvi residwi Q39 u E451 u l-istess grupp ta 'hydroxyl tas-sottostrat.Għalhekk, kemm id-dejta termodinamika kif ukoll dik kristallografika tissuġġerixxi li r-residwi Q39 u E451 jeżerċitaw influwenza reċiproka fuq l-interazzjonijiet rispettivi tagħhom mas-sottostrat.