Prodotti

Il-fosforilazzjoni tal-proteini tirregola diversi funzjonijiet ċellulari u għandha rwol ewlieni fl-iżvilupp bikri tal-pjanti.Biex tikkomplementa u tespandi l-investigazzjonijiet preċedenti tal-fosforilazzjoni tal-proteini fin-nebbieta ta’ Arabidopsis użajna approċċ alternattiv li jgħaqqad l-estrazzjoni tal-proteini taħt kundizzjonijiet mhux denaturanti b’arrikkiment tal-kromatografija tal-affinità tal-jone tal-metall immobilizzat (IMAC) ta’ fosfoproteini intatti f’estratti mnaqqsa minn Rubisco, segwit minn identifikazzjoni bl-użu ta 'elettroforeżi tal-ġel bidimensjonali (2-DE) u kromatografija likwida-spettrometrija tal-massa tandem (LC-MS/MS).Id-diġestjoni tat-trypsin fil-ġel u l-analiżi ta 'spots tal-ġel magħżula identifikaw 144 peptidi u residwi fosforilati, li minnhom instabu biss 18-il fosfopeptide u 8 fosfositi fid-databases tas-sit ta' fosforilazzjoni ta 'PhosPhAt 4.0 u P3DB Arabidopsis thaliana.Aktar minn nofs it-82 fosfoproteina identifikati kienu involuti fil-metaboliżmu tal-karboidrati, fotosintesi/respirazzjoni jew mekkaniżmi ta 'rispons għall-istress ossidattiv.L-arrikkiment ta 'fosfoproteini intatti qabel 2-DE u LC-MS/MS jidher li jsaħħaħ l-iskoperta ta' residwi ta 'threonine u tyrosine fosforilati meta mqabbla ma' metodi li jutilizzaw arrikkiment fil-livell ta 'peptide, li jissuġġerixxi li ż-żewġ approċċi huma kemmxejn komplementari f'termini ta' kopertura tas-sit ta 'fosforilazzjoni.It-tqabbil tar-riżultati għal nebbieta żgħar ma 'dawk miksuba qabel għal weraq maturi ta' Arabidopsis identifika ħames proteini li huma fosforilati b'mod differenzjali f'dawn it-tessuti, li juru l-potenzjal ta 'din it-teknika għall-investigazzjoni tad-dinamika tal-fosforilazzjoni tal-proteini matul l-iżvilupp tal-pjanti.